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磁性微球使用說明
發布時間:2011/9/13 19:51:07 瀏覽次數:6024次 來源:英諾生物

磁性微球使用說明


      鄭州英諾生物科技有限公司生產的磁性微球具有以下特點:

1. 粒徑大小均勻(分散性極好,減少非特異性吸附,易再懸?。?,
2. 磁響應強,
3. 表面涂覆一層保護層,無磁性材料泄露,
4. 表面再涂覆一層親水惰性聚合物,大大減少非特異性吸附(惰性極好),
5. 表面然后帶上不同化學功能團,
6. 最后有效地嫁接具有特異性的抗體、蛋白和核酸,可應用于核酸純化、細胞篩選、免疫分析、臨床診斷等多個領域,是醫學、分子生物學研究中不可或缺的分離純化工具。

 
      磁性微球的使用必須依靠多功能磁分離架。鄭州英諾生物科技有限公司生產的多功能磁分離架磁力強、分離快、適用于多種規格尺寸的離心管分離磁性微粒。磁分離架帶有10個10mm直徑(1mL和2mL vials)及2個16mm直徑(10-15mL vials)的孔供選擇使用。
 
      為延長磁性微球使用壽命,在其溶液中添加了0.01%疊氮化鈉(NaN3)作為抑菌劑(避免皮膚直接接觸)。使用前先用去離子水或適當緩沖液震蕩或超聲清洗,放入磁力架一般2-5分鐘后,磁性微球就可以被吸到靠近磁鐵的一面,然后用帶細尖口槍頭小心地吸取清液,不要吸走磁球(可保留一些液體,多洗幾次)。加反應液后需震蕩一定的時間,反應后按照上述方法清洗。


英諾生物磁性微球(Magpearl COOH)表面生物分子嫁接方案:

I)用EDC和NHS活化

1. 搖勻磁球后,從小瓶中移取一定體積(比如500μL)含有羧酸基團的磁珠,用等體積的去離子水和濃度為50 mM、pH值為6的MES各洗兩次;
2. 把EDC溶解在冷卻的50 mM、pH值為6的MES溶液中配制成100 mg/mL的溶液;
3. 同樣地,于冷卻的50 mM、pH值為6的MES溶液中配制100 mg/mL的NHS溶液;
4. 加200μL EDC溶液和200μL NHS溶液到洗過的磁珠溶液中,充分混合,并在室溫條件下震蕩30min;
5. 震蕩結束后,磁分離3-4min并除去清液,用500μL 濃度為50 mM、pH值為6的MES洗兩次,洗完后的磁珠已經被活化,分散在緩沖液中,可以用于含氨基基團的配體的鍵合?!?br />
Ⅱ)活化后配體的固定

1. 加入適量(0.01-0.5mg)配體到大約200μL濃度為50 mM、pH值為6的MES緩沖液中,然后把此溶液加到活化的磁珠溶液中;
2. 如需要再補加一定量濃度為50 mM、pH值為6的MES到上述溶液中,使最終體積為500μL,確?;旌暇鶆?;
3. 在室溫條件下至少震蕩1h或在4℃ 條件下震蕩3h;
4. 震蕩結束后,磁分離3-4min并除去清液;
5. 按下述步驟封閉和清洗鍵合的磁珠。

Ⅲ)屏蔽未反應的表面

為了除去未起作用的活化羧酸基團,含有配體且鍵合過的磁珠在室溫條件下,要么用濃度為50mM,pH值為7.4的Tris震蕩15min,要么用濃度為50mM的乙醇胺的磷酸鹽緩沖液(pH 8.5)震蕩 60min;
1. 涂覆過的磁珠需要用500μL 的PBS溶液或者50mM的Tris 洗三次,溶液中可以加入0.1 - 0.5 %的BSA或者脫脂奶粉做封閉液封閉一些活性位點。
2. 涂覆過的磁珠重新懸浮于所需濃度的 PBS緩沖液或Tris儲存液中,在2 - 8℃條件下儲存備用。 涂覆的磁珠在2 - 8℃時如果固定配體非常穩定,通??梢詢Υ鎺讉€月,還可以加入0.02%(w/v)疊氮化鈉(NaN3)作為抑菌劑。

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