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液相色譜柱的使用
發布時間:2011/5/23 17:42:25 瀏覽次數:5224次 來源:英諾生物

1、液相生物柱的使用說明: 
   (1)液相生物柱使用前注意事項:生物柱的儲存液無特殊說明,均為評價報告所示的流動相。在使用前,一定要注意生物柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相生物中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞生物柱。
   (2)流動相:流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用生物純,配流動相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好,尤其是含鹽的流動相。另外,裝流動相的容器和生物系統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。
      以常規硅膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0,BDS C18適合于堿性化合物,PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用生物柱時,每次使用結束后立即用適合于生物柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗,并完全置換掉原來所使用的流動相。
   (3)樣品:樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預處理柱(SPE)對樣品進行預處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。在用正相生物法分析樣品時,所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。
2、液相生物柱的保存: 
   (1)反相生物柱每天實驗后的保養:使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉生物柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
   (2)長期保存生物柱:如生物柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將購買新生物柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。
3、液相生物柱的再生: 
      因為生物柱是消耗品,隨著使用時間或進樣次數的增加,會出現生物峰高降低,峰寬加大或出現肩峰的現象,一般來說可能是柱效下降。
   (1)反相柱的再生:依次采用20-30倍的生物柱體積的甲醇:水=10:90 (V/V),乙腈,異丙醇作為流動相沖洗生物柱,完成后再以相反順序沖洗生物柱。
   (2)正相柱的再生:依次以20-30倍生物柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗生物柱,然后再以相反的順序沖洗生物柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
4、液相生物柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法: 
      生物柱在使用中最常見的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,屬于正?,F象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外),以下列舉了部分常見原因及解決辦法:
    (1)生物柱頭的過濾篩板堵塞或污染;
      解決方法:如確定是生物柱頭的過濾篩板被污染,可以將生物柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下生物柱頭,將其放在10%的稀硝酸內超聲清洗10分鐘,后再用純水超聲10分鐘,重新裝入生物柱。
    (2)生物柱頭的填料被樣品污染;
      解決方法:如確定生物柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修復后,重新安裝上柱頭螺絲。
    (3)生物柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結晶析出; 解決方法:如確定定是鹽結晶,用10%的甲醇/水沖洗生物柱使柱內鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。
    (4)流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。解決方法:如果因PH值使用不當,很難恢復。

 
 

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